ヒト腸オルガノイド培養方法

3. ヒト腸オルガノイドの凍結ストック作製

手順  
①継代から2-5日間培養したオルガノイドを用いる。 継代3日目のオルガノイド写真
②ウェルの培地を除去する。 ＜方法 2. ヒト腸オルガノイドの継代（酵素分散法）＞の手順①～③の動画をご覧ください。
③250 µLのTrypLE™ Express Enzyme（Thermo Fisher Scientific）をウェルに添加して、チップの先でゲルを崩す。

※TrypLE™はThermo Fisher Scientificの登録商標です。
④15 mLの低吸着チューブに③全量を回収する。
⑤15 mLチューブを湯浴で37°C、5～10分処理し、ピペッティング（20-30回程度）で細胞を分散させる。 15mLチューブを湯浴で処理
⑥Basal mediumを9 mL添加する。 Basal mediumを添加
⑦遠心（400 g × 3分、室温）する。
⑧上清を除去する（細胞がペレットとなっていることを確認してから行う）。 上清の除去
⑨遠心（400 g × 3分、室温）する。
⑩残った培地をピペットマンで除去する（細胞を吸ってないことを確認する）。
⑪500 µLのCell culture freezing mediumを加えて懸濁する。
⑫凍結バイアルに全量加えてCoolCell（CORNING）で-80°C一晩保存し、翌日、-150°Cに保管する。

その他の培養工程

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