総合受託トップ > CyTOF マスサイトメトリー測定受託

CyTOF® マスサイトメトリー測定受託


サービスの概要

CyTOF®(cytometry by time-of-flight: CyTOF®)とは、フローサイトメトリーで使用される蛍光標識抗体の代わりに、金属同位体標識抗体を用いて細胞内外のタンパク質を検出する技術です。フローサイトメトリーは、検出する蛍光色素が増加すると色素間のクロストークが増加して蛍光補正が困難ですが、CyTOF®では金属同位体標識を用いるため、クロストークは非常に小さく(図1)、40以上のパラメーターの解析が同時に可能となりますので、多岐にわたる多変量解析が実施できます。これにより、従来検出が困難であった細胞集団の同定や細胞表面や細胞内タンパク質の網羅的な解析が可能です(図2)。
本サービスの測定ではHelios, a CyTOF® Systemを使用致します(図3)。

 
図1:金属安定同位体のスペクトルと従来の蛍光スペクトル



 
図2:さまざまな解析(受託サービスでは解析はお受けしておりません)

 
図3:Helios, a CyTOF® System


技術について

特徴

・金属安定同位体がラべリングされた抗体を用います。

・細胞表面と細胞内タンパク質を40種類以上のパラメーターで解析可能です。
・600種類以上のヒト・マウスなど標識抗体のパネルで解析ができます。
・多変量データ解析ソフトでの解析が可能です(データ取得までです)。

1.金属同位体標識抗体の結合した細胞懸濁液(1×106 cells/mLが最適)を用意
2.ネブライザの中に注入し1細胞ごとにエアロゾル化
3.エアロゾル化した細胞は6000°Cのプラズマ内で分解され、測定対象となる金属元素がイオン化される。
4.5.質量分析部で各同位体のシグナルが検出される。シグナルの強度はサンプル内の各同位体の濃度に相関することから1細胞に存在する各同位体が定量化される。
6.データはフローサイトメトリーと同様のfcs形式ファイルで取得。
7.専用のソフトウェア(Cytobank)で解析。フローサイトメトリー用の解析ソフトウェアでの解析も可能。


金属安定同位体の利点

金属安定同位体は、シグナルのオーバーラップがなく、細胞内在性成分による自家蛍光の影響を受けません。
それにより、細胞表面と細胞内タンパクを同時に測定し、高精度な解析が可能です。

Helios, a CyTOF®Systemの機器の特性、パネル製品や金属標識抗体の詳細については、フリューダイム株式会社のWebsiteを確認ください。
https://jp.fluidigm.com/products/helios
https://jp.fluidigm.com/reagents/mass-cytometry


受託サービスについて

本受託は「株式会社聖路加医学生物学研究所(SLMBL)」でのサービスです。
お客様にて金属標識抗体で染色された細胞、もしくはSLMBLで染色した細胞を測定します。

測定機器 Helios, a CyTOF® System
サンプル 細胞 5 x 105/mL以上の細胞数(1 mL以上)
納品物 測定データ(fcs形式)
(データ解析はお受けしておりません。多変量データ解析はFlowJoなどのフローサイトメトリー用の解析ソフトウェアまたは「Cytobank」をご利用ください。)
納品方法 クラウド


抗体染色をした細胞を送付される場合

  • MaxPar Fix and Perm Buffer(#201067)で固定された染色済み細胞を冷蔵で送付してください。 
    冷蔵で10日間は安定です。
  • 標識された同位体の種類は必ず連絡してください。
  • 測定基本料金 29,000円/サンプルxサンプル数(細胞数の検定、インターカレーター染色料金含む)

注意:凝集の多い場合は充分な解析数が得られない場合があります。また、流路のつまりなどが起こることもあり、測定ができない場合があります。


未染色の細胞を送付される場合

  • 血球細胞のみの受付です。
    注意:ヘパリン採血実施後24時間以内にSLMBL社へ到着するようにお送りください。
  • 測定基本料金 30,000円/測定料+抗体料金費用実費
  • 抗体はパネル抗体キットおよびFludigm社追加抗体から選択できます。左記以外の抗体の使用を希望される場合はご相談ください。
  • Cell-ID, 20-Plex Pd Barcoding Kitを用いたcell barcodingを実施した検体の測定のも可能です。ご希望の場合はご相談ください。

輸送費はお客様ご負担となります。土日祭日およびSLMBL休業日の受け取りはできません。発送前にSLMBLへの到着日を連絡ください。



© 2017 Fluidigm Corporation. All rights reserved.