オルガノイド培養用 Afamin/Wnt3a CM
特長
- 安定したWnt3a活性
- 無血清培地によるオルガノイド培養が可能
- オルガノイドの長期培養の実現
Wntタンパク質の重要性
Wntシグナルは初期発生や幹細胞の維持と再生、がん化に関与していることが知られており、これらの増殖・維持に重要な役割を果たしています。特にWnt3aは腸管上皮細胞におけるLgr5陽性幹細胞の増殖維持に必須のニッチ成分であることが明らかとなり、小腸、大腸、胃、膵臓、肝臓など様々な消化管オルガノイドの作製に使用されています。
Afamin/Wnt3aについて
Wnt3aは、従来より消化管オルガノイドの培養に利用されていましたが、脂溶性タンパク質であるため無血清培養液中で凝集体を形成し、十分に活性を発揮できないことが課題でした。
Miharaらは、血清の構成成分の一つであるAfaminがWnt3aと複合体を形成することにより、高いWnt3a活性が維持できることを見出しました（PMID: 26902720）。また、 AfaminとWnt3aの複合体をオルガノイドの培養に使用することにより、オルガノイドの長期培養が可能となりました。
Afamin/Wnt3aコンプレックスの概要図
Afamin/Wnt3aコンプレックスの安定性
Mihara, et al, eLife (2016) [PMID: 26902720]
Afamin/Wnt3a CMを用いた消化管オルガノイドの長期培養
Wnt3a CM（Wnt3a単独発現培地）、Wnt3a精製品及びAfamin/Wnt3a CM（Afamin/Wnt3a共発現培地）存在下で消化管オルガノイドを長期培養しました。
Afamin/Wnt3a CM存在下では、18日間の長期培養でもオルガノイドが維持できました。
Mihara, et al, eLife (2016) [PMID: 26902720]
Afamin/Wnt3a CMによるLGR5陽性細胞の維持培養
Afamin/Wnt3a CM及び他社製品の組換えWnt3a存在下で、Lgr5プロモーターの制御下にtdTomatoを発現するオルガノイド株を培養しました。Afamin/Wnt3a CM存在下での培養では、高いレベルでLGR5陽性細胞を維持していることが確認できました。
出典：慶應義塾大学医学部坂口光洋記念講座（オルガノイド医学）佐藤俊朗教授との共同研究成果より
Afamin/Wnt3aを用いた原発性卵巣がん組織検体からのオルガノイドの樹立及び株化
Afamin/Wnt3a CM及び競合他社のRecombinant Wnt3a存在下で、原発性卵巣がん組織検体からオルガノイドの樹立を行いました。
Wnt依存性のがん組織において、Afamin/Wnt3a CM存在下ではオルガノイド培養成功率及びオルガノイドの株化数増加が確認できました。
| 検体数 | 初代培養成功数（培養成功率） | オルガノイド株化成功数 | |
|---|---|---|---|
| Afamin/Wnt3a CM | 23 | 17（74%） | 9 |
| 競合他社製 Recombinant Wnt3a | 13 | 6（46%） | 0 |
*高異型漿液性癌を除いた結果
Wntタンパク質の活性強度は初代培養や、オルガノイド樹立の成功率を左右するものであり、Afamin/Wnt3aは、競合他社品のWnt3aと比較してWntアゴニスト活性が安定して高いため、表のように初代培養および株化の効率が上がるものと考えられます。
卵巣がん組織とオルガノイドの染色像
Afamin/Wnt3a CM存在下で樹立したオルガノイドは、組織検体と同様の組織学的な特徴及びp53陽性パターンを反映していました。
-
Nanki Y, et al, Scientific Reports (2020) [PMID: 32724113]
-
- CCC : clear cell
- HGSC : high-grade serous
- EM : endometrioid
Wnt3a試薬の比較
| Afamin/Wnt3a CM | Purified Wnt3a | Wnt3a conditioned medium prepared in lab | |
|---|---|---|---|
| Wnt3a活性 | Afaminによって安定化された 高いWnt3a活性 |
培養液中で凝集体を形成するため 不十分なWnt3a活性 |
血清で安定化された 高いWnt3a活性 |
| 品質評価 | Wnt3aシグナル活性評価 | 多くはタンパク質定量 Wnt3a活性にLot間差がある場合もある |
各研究室で調製されており、 発現量・活性ともに未確認 |
| 血清の有無 | 無血清 | 無血清 | 血清入り 血清由来成分がオルガノイド培養に 影響を与える恐れあり |
Afamin/Wnt3a CM 製品仕様
Afamin/Wnt3a CMはAfaminとWnt3aタンパク質を無血清培地中に共発現させたConditioned Mediumであり、無血清培地中で高いWnt3a活性が期待できます。
| Code No. | 品名 | 主要成分 | 包装形態 | 溶媒 | 保存期間 |
|---|---|---|---|---|---|
| J2-001 | Afamin/Wnt3a CM | Mouse Wnt3a Human Afamin |
10 mL | Advanced D-MEM/F-12 |
ラベルに記載 |
関連製品 Recombinant Afamin/Wnt3a
Recombinant Afamin/Wnt3aは、Afamin/Wnt3a複合体の精製品です。
| Code No. | 品名 | 主要成分 | 包装形態 | 溶媒 | 保存期間 |
|---|---|---|---|---|---|
| J2-002 | Recombinant Afamin/Wnt3a | Mouse Wnt3a Human Afamin |
60 µg/300 µL | 20 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl |
ラベルに記載 |
Recombinant Afamin/Wnt3aによるLGR5陽性細胞の維持培養
Recombinant Afamin/Wnt3a及び競合A社のRecombinant Wnt3a存在下で、Lgr5プロモーターの制御下にtdTomatoを発現するオルガノイド株を培養しました。Recombinant Afamin/Wnt3aは低濃度でもLGR5陽性細胞を維持していることが確認できました。
出典：慶應義塾大学医学部坂口光洋記念講座（オルガノイド医学）佐藤俊朗教授との共同研究成果より
参考文献
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